兔年談之十三：歐盟技術(shù)問答揭示的生物制品注冊新要求

       生物制品作為大分子藥品，以兼具復(fù)雜生產(chǎn)工藝和復(fù)雜質(zhì)量屬性，被世界各國藥政當(dāng)局給予關(guān)注和嚴(yán)格監(jiān)管。同樣，生物制品的注冊要求和日常監(jiān)管要求，也和監(jiān)管方對化藥、中藥等技術(shù)要求體現(xiàn)出明顯不同的特征。EMA作為歐盟一體化產(chǎn)物，自成立以來就承擔(dān)了對于復(fù)雜藥品的管理法規(guī)和政策制定和技術(shù)審評任務(wù)；對于生物制品的管理，EMA一直保持謹(jǐn)慎和透明的政策。

       EMA為了促進(jìn)行業(yè)和監(jiān)管方的順利溝通，發(fā)布了很多技術(shù)問答；這些問答涵蓋GMP、各類具體問題和通用技術(shù)問題。在2023年9月，EMA最新發(fā)布了針對生物制品的技術(shù)問答，為行業(yè)人士了解歐盟生物制品注冊要求提供了一個窗口。

       近幾年，隨著中國創(chuàng)新藥企業(yè)實力在不斷增強(qiáng)，越來越多的企業(yè)開啟了生物制品在歐盟注冊之旅。其中復(fù)星醫(yī)藥集團(tuán)下屬的復(fù)宏漢霖較早的把單抗產(chǎn)品推向歐盟市場，已經(jīng)在注冊工作和GMP認(rèn)證工作方面取得成功。筆者搜集EMA官網(wǎng)的涉及生物制品的技術(shù)問答，翻譯整理，希望可以為行業(yè)發(fā)展提供借鑒。下面技術(shù)問題次序按照EMA官網(wǎng)發(fā)布的次序來依次介紹。

       ◆返工管理部分

       1、是否應(yīng)該在申報資料中明確涵蓋生物制品返工工藝？

       答復(fù)：如果生物制品申報資料中未提及返工工藝，則假定未申請返工工藝。但是，鼓勵申請人在CTD文件的第3.2.S.2.2或3.2.P.3.3部分中明確說明：

       -可以在哪個步驟進(jìn)行返工處理。這應(yīng)該得到適當(dāng)?shù)墓に囼炞C數(shù)據(jù)的支持；

       -也可以在制造工藝中的任何步驟都沒有返工描述。藥品上市申請批準(zhǔn)后可以通過變更程序增加返工工藝。

       ◆原材料和培養(yǎng)基管理

       1、是否應(yīng)在申報資料中反映培養(yǎng)基成分的詳細(xì)組成?

       答復(fù)：如果培養(yǎng)基是從外部供應(yīng)商采購的，并且無法獲得培養(yǎng)基組分的定量構(gòu)成細(xì)節(jié)，則培養(yǎng)基組分的定性組成信息就足夠了。在這種情況下，應(yīng)在CTD文件的第3.2.S.2.3節(jié)中確認(rèn)與供應(yīng)商達(dá)成協(xié)議，在培養(yǎng)基發(fā)生變更時通知MAH。

       ◆分析方法識別碼部分

       1、 分析方法識別號碼應(yīng)該包括在生物制品申報資料中嗎?

       答復(fù)：內(nèi)控分析方法的識別號碼應(yīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)中。方法描述和方法驗證摘要應(yīng)更新，以包括非藥典方法的內(nèi)控方法識別號碼。需要這些信息，以便在放行標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)與用于檢測的分析方法的描述和驗證文件之間提供明確的關(guān)聯(lián)聯(lián)系。

       ◆工藝驗證、工藝相關(guān)雜質(zhì)去除、工藝相關(guān)雜質(zhì)測試部分

       1. 生物制品原液/成品標(biāo)準(zhǔn)中是否可以省略與工藝相關(guān)的雜質(zhì)檢測?

       答復(fù)：如果通過驗證研究證明可以一致地去除工藝相關(guān)的雜質(zhì)，并且有足夠的批次數(shù)據(jù)，則可以對工藝相關(guān)的雜質(zhì)檢測采取非常規(guī)檢測策略。更好的做法是，在工藝評價研究中通過加標(biāo)實驗或在相關(guān)制造步驟中展示穩(wěn)健的雜質(zhì)去除能力來證明對雜質(zhì)控制能力。當(dāng)在最壞的條件下運(yùn)行時，相關(guān)的生產(chǎn)步驟能夠?qū)㈦s質(zhì)去除到足夠的水平，這應(yīng)該是合理的。

       這不適用于具有高安全風(fēng)險的雜質(zhì)和蛋白質(zhì)雜質(zhì)(如HCPs)，這些雜質(zhì)通常需要常規(guī)控制。

       ◆宿主細(xì)胞蛋白測試、生物制品原液標(biāo)準(zhǔn)部分

       1. 生物制品原液標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)該包括宿主細(xì)胞蛋白檢測嗎?

       宿主細(xì)胞蛋白（HCP）檢測通常是原液標(biāo)準(zhǔn)的一部分，視情況而定。HCP的常規(guī)控制被認(rèn)為是重要的，因為這可能是一個相關(guān)的安全參數(shù)，即僅根據(jù)工藝驗證研究省略HCP檢測是不合適的。在獲得足夠的生產(chǎn)經(jīng)驗和大量的批次數(shù)據(jù)證明HCP水平持續(xù)處于較低水平之前，應(yīng)在S.4.1中包括HCP的放行標(biāo)準(zhǔn)，并在S.4.5中規(guī)定臨床批次合格的上限。如果滿足以下條件，HCP可在中間體上進(jìn)行測試，并報告為關(guān)鍵工藝控制：

       o 申請人對制造工藝有廣泛的了解和控制（應(yīng)確定影響HCP水平的關(guān)鍵工藝參數(shù)），

       o 縮小規(guī)模的工藝確認(rèn)研究，隨后是規(guī)?；に囼炞C和批次數(shù)據(jù)結(jié)果，證明HCP處于合格水平，

       o 確認(rèn)超過IPC的驗收標(biāo)準(zhǔn)將導(dǎo)致批量拒收，

       o 建議的IPC限度在臨床研究階段被證明是合格的。

       o HCP檢測將作為未來工藝變更可比性評估的一部分（如相關(guān)）。

       無論HCP是作為IPC常規(guī)測試還是作為放行測試，HCP分析都應(yīng)該被很好地描述和驗證，并且接受限度應(yīng)該是合理的;所有文件應(yīng)包含在CTD中報告(第S.4節(jié)或第S.2.4節(jié))。應(yīng)評估檢測多克隆抗體的適用性(如Ph.Eur.2.6.34所述，HCP代表該工藝的覆蓋范圍)。此外，來自Ph. Eu 2.6.34的其他建議也應(yīng)由申請人處理。

       ◆生物類似藥產(chǎn)品：表征、同步比較、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、生物相似性、分析可比性部分

       1. 如何在臨床上證明生物類似藥的標(biāo)準(zhǔn)限度是合理的?

       答復(fù)：由于大多數(shù)生物類似藥申請只使用有限數(shù)量的臨床批次，因此不可能僅根據(jù)擬議生物類似藥的臨床批次設(shè)置和論證臨床階段的標(biāo)準(zhǔn)限度。因此，參比生物制品的表征結(jié)果(由申報人使用他們自己的確認(rèn)的/驗證的用于擬議生物類似藥的測試方法獲得)可用于擬議生物類似藥標(biāo)準(zhǔn)限度的臨床標(biāo)準(zhǔn)的論證。對于已上市參比生物制品批次所獲得的結(jié)果范圍，可以假定代表各自質(zhì)量參數(shù)的臨床合格范圍。

       關(guān)于工藝相關(guān)雜質(zhì)（如宿主細(xì)胞DNA和HCP），由于工藝本身并不相似，在大多數(shù)情況下，申請人不能參考參比生物制品的表征結(jié)果來證明標(biāo)準(zhǔn)限度的合理性，工藝相關(guān)雜質(zhì)的控制策略應(yīng)基于生物類似藥的生產(chǎn)經(jīng)驗制定。

       2.是否應(yīng)該進(jìn)行同步對比以證明生物相似性？

       答復(fù)：為了證明生物相似性/分析可比性，通常不需要進(jìn)行同步對比（即單個分析實驗/運(yùn)行的測試數(shù)據(jù)）。同步對比只對那些具有高內(nèi)在運(yùn)行間變異性的測試很重要，以便最大限度地減少這種變異性。在其他情況下，來自不同實驗的數(shù)據(jù)是可以接受的。

       3.什么時候可以省略單克隆抗體Fc功能的表征檢測?

       答復(fù)：如果申請人能夠證明單克隆抗體（mAb）與不具有跨膜變體或不與已知細(xì)胞/膜相關(guān)的可溶性靶標(biāo)結(jié)合，則可以省略Fc功能測定（ADCC/CDC/ADCP）的表征檢測。在這種情況下，F(xiàn)c功能測試不需要證明制造變更后的可比性或生物相似性測試。

       4. 哪種類型的ADCC測定方法可用于證明單克隆抗體的生物相似性?

       答復(fù)：ADCC活性的評估不應(yīng)僅基于報告基因測定。需要使用雙細(xì)胞形式的"經(jīng)典"ADCC測定方法，即靶細(xì)胞加效應(yīng)細(xì)胞（如NK細(xì)胞或PBMC），以證明具有ADCC功能的單克隆抗體的生物相似性。

       5.對于單克隆抗體，是否應(yīng)將與Fc受體多晶型的結(jié)合納入生物相似性研究？

       答復(fù)：如果與FcγRIIa的結(jié)合是一個相關(guān)的質(zhì)量參數(shù)，那么生物相似性實驗應(yīng)該包括與多晶型受體變體131H和131R的結(jié)合。

       如果與FcγRIIIa的結(jié)合是一個相關(guān)的質(zhì)量參數(shù)，那么生物相似性實驗應(yīng)該包括與多晶型受體變體158V和158F的結(jié)合。

       ◆單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)、ADCC活性

       1.單克隆抗體ADCC活性的常規(guī)控制需要什么標(biāo)準(zhǔn)的測試？

       答復(fù)：對于具有抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒 性(Antibody Dependent Cell-mediated Cytotoxicity, ADCC)活性的單克隆抗體，在標(biāo)準(zhǔn)中只需一個參數(shù)就足以驗證該功能?？赡艿臋z測包括細(xì)胞ADCC檢測、FcγRIIIa結(jié)合或相關(guān)的糖譜檢測;后兩個參數(shù)更可靠，根據(jù)它們與ADCC測定的相關(guān)性，其中一個參數(shù)優(yōu)于ADCC測定。事實上，當(dāng)效應(yīng)功能的控制是基于FcγRIIIa結(jié)合或糖譜的測試時，ADCC與提議的FcγRIIIa結(jié)合試驗或糖基化參數(shù)之間應(yīng)該存在相關(guān)性。根據(jù)特定的分子，控制可以基于聚焦化(G0+G1+G2)，高甘露糖形式(例如M5+M6+M7+M8)，總聚焦化(G0+G1+G2+高甘露糖形式)或這些參數(shù)的幾個組合，選擇任何與ADCC最相關(guān)的指標(biāo)即可。

       ◆生物制品制劑中聚山梨酯測試部分

       1. 成品標(biāo)準(zhǔn)中是否應(yīng)包括聚山梨酯的檢測?

       答復(fù)：如果成品配方中含有聚山梨酯，并且在配方開發(fā)研究中證明聚山梨酯是防止顆粒形成的相關(guān)成分，或者顆粒形成與聚山梨酯降解有關(guān)，那么對聚山梨酯的檢測不僅應(yīng)包括在常規(guī)放行中，還應(yīng)包括在穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)中。或者，可以提供足夠的藥物/配方開發(fā)數(shù)據(jù)來證明聚山梨酯限度在成品的擬議有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，以證實在穩(wěn)定性研究期間省略此類檢測是合適的。

       ◆內(nèi)毒素較低回收率、內(nèi)毒素掩蔽效應(yīng)

       1、什么時候應(yīng)該調(diào)查內(nèi)毒素較低回收率(LER，也稱為"內(nèi)毒素掩蔽效應(yīng)")?

       答復(fù)：對于含有表面活性劑（如聚山梨酯）和螯合劑（如EDTA、檸檬酸鹽、磷酸鹽、組氨酸）組合的產(chǎn)品配方，應(yīng)在MAA的申報資料中提交內(nèi)毒素較低回收率（LER）的研究數(shù)據(jù)。為此，應(yīng)對未稀釋的樣品進(jìn)行加標(biāo)/保持時間研究。根據(jù)當(dāng)前的科學(xué)技術(shù)水平，應(yīng)至少進(jìn)行四個時間點，以確保結(jié)果的有效性和準(zhǔn)確性。連續(xù)兩個數(shù)據(jù)點低于50%的回收率（藥典下限），應(yīng)視為LER。

       如果檢測到LER，申請人應(yīng)提出適當(dāng)?shù)木徑獠呗裕ɡ鐟?yīng)優(yōu)化藥典方法或開發(fā)替代方法）。對于發(fā)現(xiàn)具有LER效應(yīng)的產(chǎn)品，強(qiáng)烈建議根據(jù)實際制造商的數(shù)據(jù)，將細(xì)菌內(nèi)毒素的成品標(biāo)準(zhǔn)限度設(shè)定在合理可達(dá)到的最低水平。這種方法將有助于確保在成品內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)限度中建立更大的安全裕度。推薦將LER研究放在CTD的3.2.P.5.3節(jié)（方法驗證）。

       ◆使用重組技術(shù)生產(chǎn)的非-新型輔料

       1.使用重組技術(shù)生產(chǎn)的輔料的數(shù)據(jù)要求是什么？

       答復(fù)：對于使用重組技術(shù)生產(chǎn)的輔料，不被認(rèn)為是新型輔料，需要提交某些生產(chǎn)和控制信息，以確保質(zhì)量一致。除了CTD模塊3.2.P.4"輔料控制"（標(biāo)準(zhǔn)、分析方法、方法驗證和標(biāo)準(zhǔn)論證）外，申請人還應(yīng)提供以下方面的詳細(xì)信息：制造商、制造工藝說明、材料控制、工藝驗證、表征、雜質(zhì)檢測、穩(wěn)定性和病毒安全性評估（包括去除/清除相關(guān)模型病毒的過程能力證明）。信息應(yīng)在3.2.A.3節(jié)輔料中提供。       

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       作者簡介：zhulikou431，高級工程師、PDA會員、ISPE會員、ECA會員、PQRI會員、資深無菌GMP專家，在無菌工藝開發(fā)和驗證、藥品研發(fā)和注冊、CTD文件撰寫和審核、法規(guī)審計、國際認(rèn)證、國際注冊、質(zhì)量體系建設(shè)與維護(hù)領(lǐng)域，以及無菌檢驗、環(huán)境監(jiān)控等領(lǐng)域皆具有較深造詣。近幾年開始著力關(guān)注制藥宏觀領(lǐng)域趨勢分析和制藥企業(yè)并購項目的風(fēng)險管理工作。