2023年4月24日，國家藥典委員會(huì)官網(wǎng)發(fā)布“關(guān)于通則0502 薄層色譜法修訂草案的公示”，擬對(duì)2020年版《中國藥典》第四部第59頁收入的方法——0502 薄層色譜法部分內(nèi)容進(jìn)行修訂，公示期自發(fā)布之日起3個(gè)月。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，是藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的常用方法之一。
一、了解薄層色譜法常用專業(yè)術(shù)語
1.薄層色譜法（Thin-layer chromatography, 簡(jiǎn)稱TLC)：
系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對(duì)比，亦可用薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。
2.薄層色譜掃描法：
系指用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別、檢查或含量測(cè)定?？筛鶕?jù)不同薄層色譜掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，按照規(guī)定方式掃描測(cè)定，一般選擇反射方式，采用吸收法或熒光法。除另有規(guī)定外，含量測(cè)定應(yīng)使用市售薄層板。
3.比移值（Rf）：
系指從基線至展開斑點(diǎn)中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比值。
二、常見的薄層色譜法儀器，你認(rèn)識(shí)幾種？
在藥品檢測(cè)領(lǐng)域，有“四大名譜”，它們分別為色譜、光譜、質(zhì)譜、波譜，可以說只要有分析任務(wù)的地方都在使用色譜分析法，薄層色譜法（ TLC）因其操作簡(jiǎn)單、成本低廉、靈敏度高、分離速度快、可同時(shí)分析多個(gè)樣品而成為目前應(yīng)用最廣泛的分離技術(shù)之一，常見的薄層色譜法儀器分別是：
1)薄層板：按支持物的材質(zhì)分為玻璃板、塑料板或鋁板等；按固定相種類分為硅膠薄層板、鍵合硅膠板、微晶纖維素薄層板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等。
2)點(diǎn)樣器： 一般采用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材。
3)展開容器：上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉。水平展開用專用的水平展開槽。
4)顯色裝置：噴霧顯色應(yīng)使用玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的展開缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開缸或適宜大小的干燥器代替。
5)檢視裝置：為裝有可見光、254nm 及 365nm 紫外光光源及相應(yīng)的濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用。暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的光照度。
6)薄層色譜掃描儀：系指用一定波長的光對(duì)薄層板上有吸收的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)，進(jìn)行掃描，將掃描得到的譜圖和積分?jǐn)?shù)據(jù)用于物質(zhì)定性或定量的分析儀器。
三、新舊0502 薄層色譜法主要內(nèi)容搶先看
根據(jù)2020年版《中國藥典》實(shí)施以來的反饋意見，結(jié)合各國藥典色譜法通則的修訂變化，此次有以下幾項(xiàng)內(nèi)容有發(fā)生變化，紅色字體為刪除內(nèi)容，藍(lán)色字體為增訂內(nèi)容變更主要內(nèi)容對(duì)照如下：
（一）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)——分離度
定量薄層色譜法的分離度是基于兩相鄰峰（斑點(diǎn)）距離和兩相鄰峰的峰寬計(jì)算，此次修訂稿中增加了以半高峰寬計(jì)算分離度的公式。但考慮各版《中國藥典》的延續(xù)性，仍保留原有公式作為過渡，并明確當(dāng)有異議時(shí)，分離度（Rs）應(yīng)以半高峰寬（Wh/2）的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn)，主要修訂內(nèi)容如下：
(3) 分離度（或稱分離效能） 鑒別時(shí)，供試品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜中的斑點(diǎn) 均應(yīng)清晰分離。 當(dāng)在薄層色譜掃描法用于限量檢查和含量測(cè)定時(shí)， 要求定量待測(cè) 峰與相鄰峰之間有較 良好的分離度， 兩峰分離度 (Rs ) 的可用下列計(jì)算公式為計(jì)算：
式中， 
分別為兩峰的比移值， ；
分別為相鄰兩峰與原點(diǎn)的距離， ；
分別為相鄰兩峰的半高峰寬；
分別為相鄰兩峰的峰寬；
a 為展開劑遷移(展開)距離。
除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.0。
當(dāng)有異議時(shí)，分離度(
)應(yīng)以半高峰寬(
)的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn)。
式中 d2 為相鄰兩峰中后一峰與原點(diǎn)的距離；
d1 為相鄰兩峰中前一峰與原點(diǎn)的距離；
W1 及 W2 為相鄰兩峰各自的峰寬。
除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于 1.0 。
在用于化學(xué)藥品雜質(zhì)檢查的方法選擇時(shí)，可將雜質(zhì)對(duì)照品用供試品自身稀釋的對(duì)照溶液溶解制成混合對(duì)照溶液， 也可將雜質(zhì)對(duì)照品用待測(cè)組分的對(duì)照品溶液 溶解制成混合對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)溶液， 還可將采用供試品以適當(dāng)的方法降解方法獲得的溶 液作為對(duì)照溶液，上述溶液點(diǎn)樣展開后的色譜圖中，應(yīng)顯示清晰分離的斑點(diǎn)。
（二）薄層色譜條件（參數(shù)）
根據(jù)各國藥典，修訂稿增加了薄層色譜條件（參數(shù)）允許調(diào)整的內(nèi)容，并以簡(jiǎn)單示例說明如何調(diào)整，主要修訂內(nèi)容如下。
4. 色譜條件調(diào)整
品種正文項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件可作如下調(diào)整：
展開劑的組成比例： 占比小的組分，可在相對(duì)值±30%或絕 對(duì)值±2%范圍， 取較大者進(jìn)行調(diào)整；其他組分的調(diào)整不得過絕 對(duì)值 10%。占比小的組分是指小于 或等于(100/n) %組分， n 是展開劑中各組分個(gè)數(shù)。當(dāng)展開劑由 3 個(gè)組分組成， 如某組分占比為 10% ，為占比小的組分，其相對(duì)值±30%的范圍是 7%~13% ，絕 對(duì)值±2%的范圍是 8%~12% ，可在較大的相對(duì)值范圍調(diào)整。
除另有規(guī)定外，展開劑中水相組分的 pH 值可在±0.2 pH 單位范圍內(nèi)調(diào)整。 展開劑緩沖組分中鹽的濃度可在原規(guī)定值±10%范圍內(nèi)調(diào)整。
點(diǎn)樣體積： 如使用 2~10μm 的細(xì)顆粒薄層板，可在規(guī)定點(diǎn)樣體積的 10%~20%范圍調(diào)整。
應(yīng)評(píng)價(jià)色譜條件調(diào)整對(duì)分離和檢測(cè)的影響，必要時(shí)對(duì)調(diào)整后的方法進(jìn)行確 認(rèn)。若調(diào)整超出上述或品種項(xiàng)下規(guī)定的范圍， 將被認(rèn)為是對(duì)方法的修改， 需要進(jìn) 行充分的方法學(xué)驗(yàn)證。
當(dāng)對(duì)調(diào)整色譜條件后的測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生異議時(shí)， 應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件 的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。
參考文獻(xiàn)
[1]www.chp.org.cn
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