中藥鑒定新技術(shù)新方法的研究進展

       中藥鑒定是中藥研究的基礎(chǔ)，在傳統(tǒng)的中藥鑒定中，中藥材主要通過形狀、顏色鑒別和氣味等方法進行藥材鑒定。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，傳統(tǒng)的中藥鑒定方法已不能滿足現(xiàn)代中藥鑒定的需要，中藥鑒定的方法也不斷更新，出現(xiàn)了許多新技術(shù)和新方法，如 DNA分子標(biāo)記法、生物傳感器、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、光譜技術(shù)等。這些新技術(shù)不僅為中藥鑒定提供了科學(xué)依據(jù)，同時也推動了中藥鑒定方法的發(fā)展。

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       1、DNA分子鑒定技術(shù)

       DNA 分子鑒定技術(shù)是最為常見的分子鑒定技術(shù)，在中藥鑒定過程中可以根據(jù)DNA分子技術(shù)，對生物個體中的特異 DNA 片段進行有效反應(yīng)，此種鑒定方式具有較高的準(zhǔn)確性，不會受到較多外界因素的干擾，可以較為準(zhǔn)確地反映出中藥材的實際情況。DNA分子鑒定具有快速、準(zhǔn)確、高效等優(yōu)點，其檢測技術(shù)包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、基因芯片和微陣列芯片等。近年來，隨著 PCR 技術(shù)和芯片技術(shù)的發(fā)展，DNA分子鑒定技術(shù)得到了長足的進步，已廣泛應(yīng)用于中藥的鑒定，尤其是 DNA 條形碼技術(shù)，因其具有 DNA 序列信息豐富、準(zhǔn)確可靠、不受物種限制等優(yōu)點，在中藥材品種鑒別上有廣泛應(yīng)用。DNA 條形碼技術(shù)的研究還處于初級階段，需要進一步完善和發(fā)展，目前常用的 DNA 分子鑒定技術(shù)有隨機擴增多態(tài)性 DNA（RAPD）、PCR 等。

       2、蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)

       蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)包括蛋白質(zhì)電泳、同工酶、蛋白飛行時間、抗血清等鑒別技術(shù)。蛋白質(zhì)電泳鑒別常用于果實種子、動物類藥材鑒別，利用藥材中攜帶的電荷與蛋白質(zhì)分子形狀、大小的不同進行電源分析，從而能夠有效鑒定出不同種類的中藥材。同工酶鑒別技術(shù)是因為不同類型的中藥材中一般含有不同的同工酶分子結(jié)構(gòu)，同時藥材的免疫活性也不盡相同，因此可利用同工酶技術(shù)鑒別中藥材中的同工酶分子結(jié)構(gòu)，根據(jù)差別完成不同中藥材的鑒定。蛋白飛行時間質(zhì)譜鑒定技術(shù)是對中藥動物類含中藥蛋白質(zhì)/肽成分比較常用的質(zhì)量指紋圖譜的鑒別方法?？寡彖b別技術(shù)主要鑒別藥物中的蛋白質(zhì)等抗原性物質(zhì)，在中藥中很多都含有多糖、蛋白質(zhì)等抗原性物質(zhì)，采用蛋白質(zhì)標(biāo)記技術(shù)的抗血清鑒別技術(shù)能利用以上抗原性物質(zhì)，制備出相應(yīng)的特異性物質(zhì)，再通過酶聯(lián)免疫吸附法對物質(zhì)進行檢驗，從而能夠真實反映出重要的實際情況，有利于臨床上的鑒定和使用。

       3、生物傳感器

       生物傳感器是一種利用生物分子之間的相互作用來檢測待測物質(zhì)含量的一種檢測儀器。與傳統(tǒng)的檢測方法相比，生物傳感器具有靈敏度高、操作簡單、無損傷、成本低等特點。因此，生物傳感器在中藥鑒定中也得到了廣泛的應(yīng)用。以生物傳感器為基礎(chǔ)的技術(shù)主要有免疫學(xué)檢測技術(shù)和分子雜交技術(shù)等。免疫學(xué)檢測技術(shù)主要是通過將待測物與抗原或抗體結(jié)合，形成相應(yīng)的復(fù)合物，再用固定化抗原或抗體對其進行定量檢測。分子雜交技術(shù)則是利用待測物質(zhì)與相關(guān)分子特異性結(jié)合形成復(fù)合物，利用分子間相互作用來測定待測物質(zhì)含量。

       4、色譜技術(shù)

       高效液相色普技術(shù)在中藥材鑒定中具有較高的分離效果，可有效鑒別表征中藥材小分子化學(xué)成分的數(shù)量與特征，以及不相同量溶劑和不同提取分析方式可有效剔除干擾因素，把微量以富集方式呈現(xiàn)，可獲取中藥材中多種分子化學(xué)特征指紋。但高效液相色普技術(shù)需要大量的中藥材樣本，且對于不相同的中藥材鑒定需要結(jié)合不同的固定相、流動相、檢測方法，在鑒定方法上通用性極差，加之儀器的影響。高效液相色普技術(shù)使用于中藥飲片鑒定中有較高的效果。氣相色譜法是依據(jù)不相同化合物在固定氣體流與固定相之間的不同分配情況對藥材進行分析，臨床常用于檢測氣體類、易揮發(fā)類、半揮發(fā)類等物體，程序升溫法是鑒定氣相色譜法的主要方法。氣相色譜法主要是鑒定中藥熱穩(wěn)定與揮發(fā)性的化學(xué)成分，是高效液相色普的補充，但該鑒定方法沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件，因此在鑒定中無法獲取較好的結(jié)果。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是將液相色譜、氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用而形成的一種快速分析技術(shù)。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，為中藥鑒定提供了一種新的方法，極大地推動了中藥鑒定技術(shù)的發(fā)展。但是該方法也存在一定缺陷，如樣品量小、分析速度慢、樣品前處理復(fù)雜等，這些缺陷限制了該技術(shù)在中藥鑒定中的應(yīng)用。

       5、光譜分析

       光譜技術(shù)是根據(jù)物質(zhì)吸收不同波長的光，通過一定的數(shù)學(xué)運算和處理，把被測物質(zhì)的物理量轉(zhuǎn)化為譜圖信息，并以圖譜來描述其特征的一種分析方法。它不僅可用于研究物質(zhì)結(jié)構(gòu)，而且還能識別和鑒定物質(zhì)成分。光譜分析法具有檢測速度快、分析周期短、適用范圍廣、操作簡便等優(yōu)點。目前光譜分析方法主要有紫外可見分光光度法（UV）、熒光分光光度法（FL）、紅外光譜法（IR）、核磁共振法（NMR）、分子印跡聚合物指紋圖譜技術(shù)（MAS）、超分辨率激光衍射光譜儀（UPLC-DA）等。光譜技術(shù)在中藥鑒定中應(yīng)用較多，它可以對藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣進行鑒定，如紅外光譜法可用于鑒別不同產(chǎn)地中藥材，紫外-可見分光光度法可用于中藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別等。

       6、指紋圖譜

       指紋圖譜是指不同藥材或同一藥材不同部位之間存在著共有的化學(xué)成分和相同的色譜峰，利用這些共有的化學(xué)成分和色譜峰，通過一定的數(shù)學(xué)模型計算，可以看出這些共有化學(xué)成分與該藥材中所含其他成分的區(qū)別，從而對中藥進行鑒別。指紋圖譜是中藥材鑒定和質(zhì)量控制的重要方法之一，主要包括色譜指紋圖譜、顯微指紋圖譜和生物活性指紋圖譜。其中色譜指紋圖譜是中藥材鑒定的主要方法之一，也是目前應(yīng)用最為廣泛的中藥鑒定方法。色譜指紋圖譜技術(shù)具有操作簡便、快速、重現(xiàn)性好以及通用性強等優(yōu)點，已被廣泛應(yīng)用于中藥鑒定。隨著色譜技術(shù)的不斷進步，其在中藥鑒定中的應(yīng)用也越來越廣泛，如中藥化學(xué)成分指紋圖譜、中藥色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、分子印跡技術(shù)以及質(zhì)譜技術(shù)等。通過不同方法的結(jié)合應(yīng)用，可將不同種類和產(chǎn)地的中藥材進行區(qū)分鑒定。

       傳統(tǒng)中藥鑒定方法主要是通過眼觀藥材形狀、手摸以及聞氣味等來判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，容易受主觀人為因素的影響，準(zhǔn)確性也不能得到保證?；诜肿铀降闹兴庤b定新方法在中藥材的真?zhèn)舞b定方面已經(jīng)取得了一些成果，DNA條形碼技術(shù)在中藥材的物種鑒定中得到了廣泛應(yīng)用，通過建立中藥材標(biāo)準(zhǔn)序列的DNA條形碼數(shù)據(jù)庫，以及檢測標(biāo)記的篩選、獲得和檢測，可以逐步實現(xiàn)中藥材物種鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化。同時，隨著中藥指紋圖譜技術(shù)和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)體系的建立，中藥材的質(zhì)量和安全性也得到了進一步保證。

       參考資料

       [1]羅倫,冉會敏.淺論中藥鑒定學(xué)新技術(shù)新方法的研究進展[J].臨床醫(yī)藥文獻電子雜志,2019,6(37):189+191.

       [2] 周正禮.中藥鑒定技術(shù)新技術(shù)新方法的研究進展[J].中國科技期刊數(shù)據(jù)庫 醫(yī)藥,2023,(第7期).

       作者簡介：小米蟲，藥品質(zhì)量研究工作者，長期致力于藥品質(zhì)量研究及藥品分析方法驗證工作，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，從事藥品檢驗分析及分析方法驗證。