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套索肽的結(jié)構(gòu)分類及其功能應(yīng)用研究進(jìn)展

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作者:小泥沙  來(lái)源:CPHI制藥在線
  2023-07-13
近年來(lái),隨著質(zhì)譜分析等技術(shù)的改進(jìn)及基因組測(cè)序的發(fā)展,對(duì)套索肽的序列和結(jié)構(gòu)多樣性得到了充分認(rèn)識(shí),對(duì)于套索肽生物合成機(jī)制也有了更深入的了解,但套索肽的生物合成及其合成相關(guān)修飾酶的異源表達(dá)純化依然面臨巨大挑戰(zhàn)。

       套索肽是一類由核糖體合成和翻譯后修飾的活性肽(RiPPs),因具有互鎖套索拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)特征而得名。其帶有螺旋結(jié)構(gòu)的C端穿過(guò)N端的內(nèi)酰胺環(huán)而形成互鎖套索樣的結(jié)構(gòu),其中N端的肽環(huán)通常由7 ~ 9個(gè)氨基酸組成。大多數(shù)套索肽N末端的氨基酸殘基通常為甘氨酸(Gly)、絲氨酸(Ser)、半胱氨酸(Cys)或丙氨酸(Ala),但近期也發(fā)現(xiàn)了N末端氨基酸為亮氨酸(Leu)的新型套索肽。套索肽大的肽環(huán)在 N-末端的氨基酸的α-氨基與天冬氨酸(Asp)或谷氨酸(Glu)的羧酸側(cè)鏈之間形成。這種結(jié)構(gòu)賦予了套索肽對(duì)化學(xué)、熱和蛋白酶降解高度的穩(wěn)定性。

       套索肽的結(jié)構(gòu)及分類

       根據(jù)套索肽所含二硫鍵的數(shù)量和形成的位置不同可將其分為4類,如下圖所示。C 端肽鏈與大肽環(huán)通過(guò)2個(gè)二硫鍵連接的套索肽被定義為Ⅰ類套索多肽(Class I);若肽鏈尾在穿出肽環(huán)之后,C 端肽鏈與大肽環(huán)間無(wú)二硫鍵連接,而是通過(guò)空間相互作用穩(wěn)定套索拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),則被稱為Ⅱ類套索多肽(Class II);若肽鏈尾C端方向序列與肽環(huán)之間只形成一個(gè)二硫鍵的套索多肽,根據(jù)其二硫鍵形成位置不同,分為Ⅲ類或Ⅳ類套索肽(Class III,Class IV),具體而言,Ⅲ類套索肽的二硫鍵將肽環(huán)與肽鏈尾相連接,而Ⅳ類的二硫鍵僅存在于肽鏈尾。其中,II 類套索肽是目前已知的套索肽中最常見(jiàn)且最 具有特征性的套索肽,通常來(lái)源于變形菌,Ⅰ類、Ⅲ類和Ⅳ類套索肽則通常來(lái)源于放線菌。來(lái)源變形菌的Ⅱ類套索肽通常具有極性親水性,從鏈霉菌中分離出來(lái)的Ⅰ類套索肽和Ⅱ類套索肽(如 MccJ25、propeptin 和anantin)則為疏水性,正是這些結(jié)構(gòu)特征決定了套索肽所具有的多種生物活性。

根據(jù)套索肽所含二硫鍵的數(shù)量和形成的位置不同可將其分為4類

       (黃色區(qū)域代表二硫健,來(lái)源參考資料[1])

       套索肽的功能應(yīng)用

       至今為止,已有報(bào)道稱某些套索肽如鏈霉菌來(lái)源的套索肽 Siamycin 等可在糖尿病的治療、靶向與癌癥有關(guān)的受體如內(nèi)皮素 β 受體等中發(fā)揮作用,同時(shí) Microcin J25 也被報(bào)道具有抗菌及受體拮抗劑等生物活性。

       1、抑菌活性

       目前已發(fā)現(xiàn)的大部分套索肽是在變形桿菌和放線菌中合成的,如羊毛硫細(xì)菌素、小菌素、微環(huán)素、藍(lán)內(nèi)酯和硫肽等。大多數(shù)套索肽都具有抗細(xì)菌的作用。許多羊毛硫抗生素對(duì)多種革蘭陽(yáng)性菌具有殺菌作用,有些對(duì)耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐萬(wàn)古霉素腸球菌和耐奧沙西林的革蘭陽(yáng)性菌等具有較好的活性。套索肽 MccJ25 對(duì)于革蘭陰性菌(如大腸埃希菌和沙門菌等)有殺傷作用,同時(shí)能夠中和內(nèi)毒素,并通過(guò)其免疫調(diào)節(jié)作用抑制炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生;活性肽MccJ25 還可以防止由腸毒素ETEC K88 引起的腸道損傷和炎癥反應(yīng),可作為一種新的預(yù)防性藥物來(lái)減少動(dòng)物、食品或人類的病原體感染。來(lái)源于鏈霉菌屬 Streptomyces sannurensis的套索肽 marinopyrroles A-F 對(duì) MRSA 也具有極強(qiáng)的抗菌活性。目前認(rèn)為套索肽的抗菌作用主要是通過(guò)2 種機(jī)制:其一是作用于細(xì)菌的細(xì)胞膜,在膜上形成離子通道,引起胞內(nèi)物質(zhì)的外漏而殺死細(xì)菌;其二是套索肽不破壞細(xì)胞膜而進(jìn)入胞內(nèi),與胞內(nèi)靶標(biāo)結(jié)合后抑制其謝,從而殺死細(xì)菌。例如,MccJ25 與細(xì)菌外膜受體蛋白 FhuA 結(jié)合,進(jìn)入細(xì)菌后抑制 RNA 聚合酶的作用,起到殺菌的作用。

       2、受體拮抗劑

       來(lái)源于Streptomyces sp 的套索肽RES-701-1 是內(nèi)皮素受體ETB 的選擇性拮抗劑。目前某些內(nèi)皮素的肽類拮抗劑由于胃腸道的降解作用而限制了其治療作用,而通過(guò)將套索肽 RES-701-1 序列來(lái)改造設(shè)計(jì)對(duì)蛋白水解具有更高穩(wěn)定的肽類拮抗劑成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。由Streptomyces coulescens 產(chǎn)生的套索肽Anantin 是第一個(gè)由微生物產(chǎn)生的心房利鈉因子拮抗劑( Atrial natriuretic factor antagonist ANP)。利鈉肽( NPs) 是一種參與維持滲透壓與血管穩(wěn)態(tài)的激素,能引起利鈉、利尿和血管舒張作用,它還顯示出抗纖維化、抗增殖和抗增生作用,并參與心臟和血管系統(tǒng)的重塑。Burkholderia thailandensis 來(lái)源的套索肽 BI-32169 是胰高血糖素受體的強(qiáng)拮抗劑,同時(shí)也是第一個(gè)序列與胰高血糖素非同源的天然肽類拮抗劑,其一級(jí)結(jié)構(gòu)與胰高血糖素有很大不同,因此涉及到 BI-32169 的拮抗作用機(jī)制目前還不清楚。由于胰高血糖素受體的肽類拮抗劑普遍的低穩(wěn)定性,其在治療方面上的應(yīng)用也遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于小分子有機(jī)物,而套索肽中套索結(jié)構(gòu)及其特殊的結(jié)構(gòu)特性使得其可為開(kāi)發(fā)新的肽類拮抗劑提高穩(wěn)定性。

       3、酶抑制劑

       Streptomyces griseoflavus 來(lái)源的套索肽 MS-271 是平滑肌肌球蛋白輕鏈激酶(Myosin light chain kinase,MLCK) 的抑制劑,通常肽類抑制劑具有更好的特異性,但由于肽在體內(nèi)的低穩(wěn)定性限制了其應(yīng)用,而套索肽類抑制劑由于其結(jié)構(gòu)特性所具有的穩(wěn)定性也為 MLCK 抑制劑藥物的研發(fā)提供了新思路。由 Microbispora sp. SNA-115 產(chǎn)生的套索肽propeptin 是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑。研究表明,Propeptin 作為絲氨酸蛋白酶抑制劑類已在動(dòng)物模型中顯示具有保護(hù)神經(jīng)、抗遺忘以及認(rèn)知增強(qiáng)的作用。MccJ25和Capistruin 是由 Proteobacteris 產(chǎn)生的通過(guò)抑制RNA 聚合酶(RNAP) 活性從而抑制細(xì)菌的套索肽。細(xì)菌RNAP(RNA 聚合酶,RNA polymerase) 是抗生素作用的重要靶點(diǎn),它對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)和生存至關(guān)重要,同時(shí)在細(xì)菌中較為保守,使得其可以在不影響真核生物RNAP 的情況下被選擇性靶向。Mukhopadhyay等的研究表明,Mccj25 通過(guò)于RNAP 二級(jí)通道菌的結(jié)合來(lái)阻斷底物與活性中心的作用來(lái)抑制轉(zhuǎn)錄。

       4、分子支架

       目前,肽類藥物被廣泛應(yīng)用于臨床治療,與小分子藥物相比,它們具有更高的靶向性,并且與以往的基于蛋白質(zhì)的治療相比,它們表現(xiàn)出較低的免疫原性。然而,傳統(tǒng)的多肽藥物由于其溶解度低、生物利用度低、穩(wěn)定性差等特點(diǎn),其應(yīng)用往往受到限制。為了解決這一問(wèn)題,通過(guò)將天然產(chǎn)生的具有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的套索肽作為一種分子支架用于表位移植開(kāi)發(fā)肽類藥物成為了其中一個(gè)解決方案。在很多腫瘤細(xì)胞中,整合素表面αvβ3亞基中的Arginine, Glycine 和 Aspartic(RGD) 是過(guò)表達(dá)的,用RGD 替換 MccJ25 中的 G12、I13 和G14 形成的雜交肽可用于癌癥識(shí)別和治療。RES-701-1具有內(nèi)皮素 B 受體拮抗功能,由內(nèi)皮素和RES-701-1 組成的雜交肽對(duì)ETB 的親和力和拮抗作用得到明顯提高。此外,將RGD 序列整合到RES-701-1中可以提高其生物活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。通過(guò)對(duì)套索肽環(huán)和尾部區(qū)域進(jìn)行修飾,可使其獲得新的生物活性。遺憾的是,截至目前,套索支架仍不能通過(guò)化學(xué)合成方法獲得,只能依賴于套索肽生物合成修飾酶的作用,而套索肽生物合成修飾酶的難于異源表達(dá)純化也為這一應(yīng)用帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

       套索肽是一類由核糖體合成并經(jīng)翻譯后修飾、具有套索結(jié)構(gòu)的天然肽。特殊的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)賦予該類肽超強(qiáng)的耐理化及蛋白酶水解的穩(wěn)定性。近年來(lái),隨著質(zhì)譜分析等技術(shù)的改進(jìn)及基因組測(cè)序的發(fā)展,對(duì)套索肽的序列和結(jié)構(gòu)多樣性得到了充分認(rèn)識(shí),對(duì)于套索肽生物合成機(jī)制也有了更深入的了解,但套索肽的生物合成及其合成相關(guān)修飾酶的異源表達(dá)純化依然面臨巨大挑戰(zhàn)。若能夠通過(guò)化學(xué)合成和基因重組對(duì)套索肽進(jìn)行定向修飾改造將進(jìn)一步拓展套索肽在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用。

       參考資料

       [1]成騁,華子春.套索肽——一種可供多肽類藥物設(shè)計(jì)和改造的多功能載體[J].藥學(xué)進(jìn)展,2019,43(10):777-785.

       [2]李欣芮,陸美玲.套索肽研究進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù),2020,27(06):587-593.

       作者簡(jiǎn)介:小泥沙,食品科技工作者,食品科學(xué)碩士,現(xiàn)就職于國(guó)內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司,從事?tīng)I(yíng)養(yǎng)食品的開(kāi)發(fā)與研究。

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