新型冠狀病毒診斷技術(shù)簡介

       美國當(dāng)?shù)貢r(shí)間8月15日，美國國家食品和藥物管理局（FDA）發(fā)布了一項(xiàng)緊急授權(quán)，允許公眾使用一項(xiàng)基于唾液的新型冠狀病毒(COVID-19)檢測方法，該方法取名為SalivaDirect，由耶魯大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院開發(fā)。這是美國FDA繼4月13日緊急授權(quán)通過羅格斯大學(xué)的RUCDR infinite Biologics及其合作方的唾液檢測法的第五種基于唾液的新冠病毒檢測方法。

       使用SalivaDirect方法檢測新冠病毒，被測試者只需要將自己的唾液裝入一個(gè)無菌器皿，然后醫(yī)務(wù)人員在這個(gè)裝有唾液的器皿中添加一種特殊試劑，最后對其進(jìn)行加熱，釋放病毒基因組，24小時(shí)內(nèi)就能獲得檢測結(jié)果。省去了繁瑣而昂貴的RNA提取步驟，SalivaDirect方法能讓人們更快獲得檢測結(jié)果，而且價(jià)格更便宜。不過和其他使用RNA提取設(shè)備的檢測方法相比，SalivaDirect方法的敏感性稍差。

       無獨(dú)有偶，繼美國耶魯大學(xué)后，以色列醫(yī)療機(jī)構(gòu)希巴醫(yī)療中心（Sheba Medical Center）近日也公開了一種新型冠狀病毒"唾液檢測法"，該檢測方法用時(shí)不到1秒，準(zhǔn)確率高達(dá)95%，成本也更低。使用該方法檢測，測試對象僅需將主要成分為生理鹽水的漱口水倒入嘴中，漱口后在吐回試劑瓶即可。然后，檢測人員將樣本放入檢測器，并連接計(jì)算機(jī)進(jìn)行測試。測試結(jié)果可以在不到1秒的時(shí)間內(nèi)在電腦屏幕上顯示出來。該方法主要是針對測試對象的唾液進(jìn)行光譜分析，因此檢測設(shè)備僅需一個(gè)比手掌稍大一點(diǎn)的盒子。連接電腦后，基于前期累計(jì)的大量數(shù)據(jù)和人工智能分析，檢測算法能夠及時(shí)給出結(jié)果。初步臨床試驗(yàn)顯示，"唾液檢測法"的準(zhǔn)確率達(dá)到了95%。

       相較于"唾液檢測法"，核酸檢測依然是新型冠狀病毒感染確診的"金標(biāo)準(zhǔn)"。目前針對新型冠狀病毒的治療依然尚無特效藥，早確診、早隔離、早治療是防止該病擴(kuò)散和提高治愈率的關(guān)鍵。核酸檢測在新冠肺炎診斷過程中發(fā)揮著重要作用，目前新型冠狀病毒常用實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目主要是核酸和抗體檢測。

       核酸檢測

       新型冠狀病毒核酸檢測是一種病原學(xué)檢測手段。核酸是所有已知生命體必不可少的組成物質(zhì)，每一物種都有獨(dú)特的核酸序列，運(yùn)用特殊手段針對新冠病毒核酸的特征序列檢測到新冠病毒的核糖核酸(RNA)，就可以確定是新冠病毒感染。核酸診斷方法使用的樣本來源多樣，有口腔拭子、咽喉拭子、鼻拭子、唾液、肺泡灌洗液、血液、尿液和糞便或直腸拭子?；赟ARS-CoV的研究發(fā)現(xiàn)，不同來源樣品檢測結(jié)果差異較大。其中取自下呼吸道的標(biāo)本，如肺泡灌洗液，檢測效果最好，從取材方便程度和陽性率綜合考慮，咽喉拭子是最為優(yōu)選的采樣方法。目前國家藥品監(jiān)督管理局已批準(zhǔn)的2019-nCoV核酸診斷試劑盒應(yīng)用的方法有熒光PCR 法、聯(lián)合探針錨定聚合測序法和恒溫?cái)U(kuò)增法。此外，一些新的實(shí)驗(yàn)室診斷方法也在開發(fā)中，如基于Cas核酸酶的診斷法和納米孔測序法等。

       核酸檢測能夠檢測到處于窗口期的患者，可以及早發(fā)現(xiàn)感染者，并且適用于大規(guī)模人群篩查。核酸檢測陽性是新冠病毒感染確診的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但核酸檢測陰性不能排除新冠病毒感染，期間可能因樣本質(zhì)量差，如口咽等部位的呼吸道樣本，樣本采集得過早或過晚，沒有正確地保存、運(yùn)輸和處理樣本，以及技術(shù)本身存在的原因，如病毒變異、PCR 抑制等原因?qū)е?quot;假陰性"。

       抗體檢測

       血清學(xué)診斷通常以待檢人群血清為樣本，通過檢測抗原或抗體來診斷病原。常用的方法有免疫吸附試驗(yàn)（包括ELISA 和核酸適配體免疫吸附試驗(yàn)）、膠體金試紙條、間接免疫熒光和病原分離，以及基于ELISA開發(fā)的電化學(xué)發(fā)光ELISA和磁微?；瘜W(xué)發(fā)光ELISA。其中，磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法是國家藥品監(jiān)督管理局目前已批準(zhǔn)的兩款2019-nCoV血清學(xué)診斷試劑盒應(yīng)用的方法。該法的原理是在免疫吸附試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用磁納米微粒技術(shù)在磁場的作用下富集酶標(biāo)抗體標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物，然后再加入酶促化學(xué)發(fā)光底物產(chǎn)生光學(xué)信號(hào)，通過具有光量子檢測功能的酶標(biāo)儀檢測。與傳統(tǒng)ELISA 相比，該法靈敏度高，特異性強(qiáng)，線性檢測范圍更寬，試劑更穩(wěn)定，自動(dòng)化操作程度更高。

       新冠病毒抗體是病毒入侵人體后，刺激人體免疫細(xì)胞生成具有保護(hù)作用的免疫球蛋白。利用抗原和抗體特異性結(jié)合的原理，通過標(biāo)記的特異性抗原檢測新冠病毒抗體。通過檢測患者血液中新冠病毒IgM 和IgG 抗體，有助于臨床醫(yī)生判斷患者所處病毒感染的時(shí)期。IgM 抗體產(chǎn)生于病毒感染后5～7天，一般持續(xù)2～3周，屬于急性感染期。IgG 抗體產(chǎn)生于病毒感染10～15 天，可持續(xù)數(shù)月甚至長期存在，屬于感染中后期或既往感染。抗體檢測可以用于對核酸檢測結(jié)果存疑，或無法使用RT-PCR 時(shí)的輔助診斷，可以回顧性診斷，或流行病學(xué)研究，了解人體免疫狀態(tài)，還可以指導(dǎo)新冠病毒**使用?？贵w檢測陰性也不能排除新冠病毒感染，抗體檢測可能會(huì)因?yàn)闃?biāo)本中存在干擾物質(zhì)(如類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補(bǔ)體、溶菌酶等)、標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本凝固不全殘留有纖維蛋白原等因素影響而出現(xiàn)"假陽性"結(jié)果。同時(shí)，由于血清學(xué)方法存在一定的窗口期以及檢測試劑盒靈敏度不同，也會(huì)出現(xiàn)"假陰性"結(jié)果。

       核酸和抗體聯(lián)合檢測

       與單一檢測手段相比，核酸和抗體聯(lián)合檢測是新冠病毒的有效檢測手段，但核酸和抗體檢測結(jié)果依然不能作為新型冠狀病毒肺炎確診和排除的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者流行病學(xué)史、臨床癥狀和其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果綜合判斷。核酸檢測病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接證據(jù)，抗體檢測的是患者血液中被刺激產(chǎn)生的特異性抗體，是間接證據(jù)。當(dāng)核酸檢測陰性時(shí)，增加抗體檢測，可以彌補(bǔ)核酸檢測容易漏診的缺點(diǎn)。核酸檢測用于檢測受試者是否攜帶病毒，而抗體檢測用于核酸檢測結(jié)果陰性的疑似患者的補(bǔ)充檢測，或疑似病例診斷時(shí)與核酸聯(lián)合檢測。一個(gè)用于疾病的鑒別診斷，確保"不錯(cuò)"，一個(gè)用于疾病的篩查，確保"不漏"，二者聯(lián)合檢測，綜合判讀，可以提高新冠病毒陽性檢出率，減少社會(huì)傳播風(fēng)險(xiǎn)。

       核酸聯(lián)合抗體檢測結(jié)果臨床判斷

       新型冠狀病毒作為一種傳染性極強(qiáng)和危害性極大的病原，已致使大量人員出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽和肺炎等癥狀，甚至死亡，同時(shí)給全球帶來重大的經(jīng)濟(jì)損失。為抑制2019-nCoV的傳播擴(kuò)散，以及使?jié)摲诨颊弑M早得以救治，快速有效的早期診斷技術(shù)成為了戰(zhàn)勝疫情的關(guān)鍵。

       參考資料：

       [1] 碾壓美國技術(shù)！以色列"唾液檢測法"1秒內(nèi)就能出結(jié)果 成本低至0.25美元

       https://m.hexun.com/news/2020-08-17/201885299.html

       [2] 廖亞金,易成功,彭志鑫,廖洋,袁增強(qiáng).新型冠狀病毒診斷技術(shù)展望[J].軍事醫(yī)學(xué),2020,44(04):258-263+268.

       [3] 岳新杰. 新冠病毒檢測知多少之一[N]. 上海中醫(yī)藥報(bào),2020-07-24(003).

       [4] [岳新杰. 新冠病毒檢測知多少之二[N]. 上海中醫(yī)藥報(bào),2020-07-31(003).

       作者簡介：小泥沙，食品科技工作者，畢業(yè)于華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，食品科學(xué)碩士，現(xiàn)就職于國內(nèi)某大型藥物研發(fā)公司，從事營養(yǎng)食品的開發(fā)與研究。