實(shí)驗(yàn)室無難題，看液相色譜柱如何四兩撥千斤

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作者：CPHI世界制藥原料中國展來源：CPHI制藥在線

2023-04-03

在分析化學(xué)領(lǐng)域，液相色譜是應(yīng)用最為廣泛的一種分離方法。其原理是將樣品溶液與固定于填充床上的流動(dòng)相進(jìn)行相對(duì)運(yùn)動(dòng)，在移動(dòng)床中各組分的分配比由流動(dòng)相的種類和流速?zèng)Q定，從而實(shí)現(xiàn)混合物中各種組分的高效分離。

在分析化學(xué)領(lǐng)域，液相色譜是應(yīng)用最為廣泛的一種分離方法。其原理是將樣品溶液與固定于填充床上的流動(dòng)相進(jìn)行相對(duì)運(yùn)動(dòng)，在移動(dòng)床中各組分的分配比由流動(dòng)相的種類和流速?zèng)Q定，從而實(shí)現(xiàn)混合物中各種組分的高效分離。一般選擇液相色譜柱的原則是，分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。

色譜方法的分類

液相色譜分離方法大致可以分為正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、疏水作用色譜、體積排除色譜、親和色譜以及手性色譜。在高效液相色譜法中，目前應(yīng)用得最廣泛的是正相色譜和反相色譜，其中反相色譜又是重中之中。

色譜分離基本原理

正相色譜的分離原理

根據(jù)溶質(zhì)極性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在吸附劑上吸附性強(qiáng)弱的差異而分離。

反相色譜的分離原理

根據(jù)因溶質(zhì)疏水性的不同而產(chǎn)生的溶質(zhì)在流動(dòng)相與固定相之間分配系數(shù)的差異而分離。

范德姆特方程

范德姆特方程（Van Deemter equation）在色譜學(xué)中是綜合考慮了分離過程中引起峰展寬的物理因素、動(dòng)力學(xué)因素和熱力學(xué)因素后得到的單位柱長的總峰展寬與流動(dòng)相流速的關(guān)系式。

液相色譜柱的結(jié)構(gòu)

液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。

柱管

多用不銹鋼制成，如果使用時(shí)柱壓不高于70kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填?？罩鹘M件均為不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。

壓帽

即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。

密封環(huán)

位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。

液相色譜柱規(guī)格

色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類

常規(guī)分析柱（常量柱），內(nèi)徑2~5mm,柱長10~30cm

窄徑柱（narrowbore），內(nèi)徑1~2mm，柱長10~20cm

毛細(xì)管柱（又稱微柱microcolumn），內(nèi)徑0.2~0.5mm

半制備柱，內(nèi)徑＞5mm

實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑20~40mm，柱長10~30cm

生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米

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高壓制備色譜柱

ASATM自適應(yīng)高壓制備色譜柱及CombiPackerTM裝柱機(jī)系列以其獨(dú)特的創(chuàng)新設(shè)計(jì)和超高的性價(jià)比贏得了廣大用戶的認(rèn)可。它是高通量藥物，天然產(chǎn)物研發(fā)和生產(chǎn)的更優(yōu)選擇，ASA 自適應(yīng)高壓制備色譜柱廣泛的應(yīng)用于小分子藥物、抗生素、糖類物質(zhì)、核酸物質(zhì)以及多肽和蛋白的制備分離，另外 ASA 自適應(yīng)高壓制備色譜柱獨(dú)特的水浴夾套設(shè)計(jì)也非常適合手性化合物拆分。

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采用專利授權(quán)耐寬pH范圍的雜化硅膠、三鍵修飾技術(shù)和特有雙封尾方式，使色譜填料達(dá)到行業(yè)領(lǐng)先的pH耐受穩(wěn)定性以及分離性能。本系列填料可降低堿性化合物方法開發(fā)難度，增加方法開發(fā)的效率和成功率。XP系列可以匹配多種儀器平臺(tái)，不僅可以實(shí)現(xiàn)UPLC-HPLC方法的無縫轉(zhuǎn)移，還可以實(shí)現(xiàn)從分析方法到制備純化同等轉(zhuǎn)化，保證方法的延續(xù)性并提高工作效率。

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東曹生命科學(xué) (Tosoh Bioscience) 是全球知名的色譜分離解決方案供應(yīng)商，近日宣布推出一款尺寸排阻 (SEC) 色譜柱新品——TSKgel UP-SW3000-LS。該色譜柱是UP-SW系列產(chǎn)品線中的新成員，由2 μm硅膠顆粒充填，孔徑為25 nm，主要用于生物治療藥物研發(fā)或質(zhì)控中的抗體、片段及多聚體的分離分析。TSKgel UP-SW3000-LS的主要特點(diǎn)是：在與MALS或MS檢測器聯(lián)用時(shí)噪音更低。針對(duì)MALS應(yīng)用時(shí)，低噪音水平意味著高信噪比和檢測靈敏度提升。針對(duì)MS應(yīng)用時(shí)，低柱流失可增加電噴霧離子化效率，增強(qiáng)整體MS的性能和設(shè)備正常運(yùn)行時(shí)間。

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行業(yè)領(lǐng)先的聯(lián)苯柱是 Restek 最受歡迎的液相色譜柱，因?yàn)樗貏e擅長分離在 C18 和其他苯基相上難以分離或早期洗脫的化合物。堅(jiān)固耐用的 Raptor 聯(lián)苯色譜柱對(duì)于生物分析測試應(yīng)用（如藥物和代謝物分析）中的快速分離非常高效，尤其是與質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)。增加早期洗脫化合物的保留，可以限制電離抑制，并且提高的選擇性，有助于消除不適合質(zhì)譜儀(MS)檢測的復(fù)雜流動(dòng)相需求。

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博蘊(yùn)生物色譜柱采用DAC動(dòng)態(tài)軸向加壓技術(shù)，活塞升降快捷平穩(wěn)，穩(wěn)壓效果好，柱床內(nèi)部始終保持恒定的動(dòng)態(tài)壓力，保證柱效；同時(shí)采用高壓彈簧蓄能密封圈和包覆PTFE的O型密封圈，保證活塞零泄漏；獨(dú)創(chuàng)液體分配系統(tǒng)，使柱效和對(duì)稱性統(tǒng)一，分離效果更好；柱底端蓋與柱管連接采用C型卡箍，拆柱省力，方便，快捷；氣動(dòng)加壓控制，滿足特殊防爆操作環(huán)境要求。

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產(chǎn)品介紹：Shodex HILIC色譜柱 VN-50 1D

Shodex HILIC色譜柱 VN-50 1D

· 填料鍵合二元醇基提高了填料表面的親水性，可以利用HILIC模式進(jìn)行分離

· 適用于分析尺寸排阻模式和一般HILIC色譜柱分離不充分的寡核苷酸和寡糖的各聚體分離

· VN-50 1D采用外部為SUS，內(nèi)部[和液體接觸部分]為PEEK的二重結(jié)構(gòu)柱管。彌補(bǔ)了PEEK柱管物理強(qiáng)度弱的缺點(diǎn)，可以在高壓條件下使用。

· VN-50 1D內(nèi)徑為1.0 mm，可以控制流速在0.1 mL/min以下，適用于高靈敏度分析。

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YMC色譜柱

YMC-Triart C18是一款具有卓越耐久性和優(yōu)秀峰形為特長的色譜柱，適用pH條件寬泛且耐高溫條件。由于對(duì)鍵合相C18進(jìn)行了致密設(shè)定，因此在適度的疏水性和親水性間實(shí)現(xiàn)了優(yōu)化設(shè)計(jì)，不僅可作為各類分析的優(yōu)選色譜柱，同時(shí)在100%水相條件下也能獲得良好的保留能力與再現(xiàn)性。

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COSMOSIL RNA系列高效液相色譜柱

COSMOSIL RNA-RP1是一款特殊鍵合技術(shù)的反相HPLC色譜柱，對(duì)寡核苷酸有很高分辨率，與常規(guī)C18具有一樣的產(chǎn)品穩(wěn)定性和選擇性，針對(duì)mRNA、ssRNA ladder、dsRNA ladder以及DNA ladder均有很好的分辨率和識(shí)別能力。

隨著實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的蓬勃發(fā)展，液相色譜柱在現(xiàn)代高效液相色譜分析中應(yīng)用的越來越廣泛，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時(shí)間，并且使方法更具穩(wěn)定性。如何將液相色譜柱的應(yīng)用融入到實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中也成為了當(dāng)下行業(yè)內(nèi)備受矚目的熱點(diǎn)問題。“世界制藥原料中國展”暨“世界制藥機(jī)械、包裝設(shè)備與材料中國展”（CPHI & PMEC China）在實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)域的延伸——實(shí)驗(yàn)室儀器與裝備展區(qū)將通過展示各類創(chuàng)新設(shè)備及應(yīng)用方案，為行業(yè)呈現(xiàn)了前沿領(lǐng)域在實(shí)驗(yàn)室建設(shè)過程中的應(yīng)用及解決方案。

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