指示病毒：會成為新藥申報的關鍵因素嗎？

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來源：北京義翹神州

2019-04-11

生物制品一般指以微生物、細胞、動物、人源組織或體液等為原料，運用傳統(tǒng)技術或現(xiàn)代生物技術制備而成，用于人類疾病的預防、治療、診斷等。

生物制品病毒安全性已經越來越被重視，在2017年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《藥品生產質量管理規(guī)范》生化藥品附錄第五章中，對病毒去除/滅活及驗證的必要性、適用性、有效性等提出具體的要求，明確基于風險控制原則，結合品種特性和原材料來源，采用有效去除/滅活病毒工藝步驟和方法。

生物制品一般指以微生物、細胞、動物、人源組織或體液等為原料，運用傳統(tǒng)技術或現(xiàn)代生物技術制備而成，用于人類疾病的預防、治療、診斷等。目前，生物制品的熱點是生物藥的研發(fā)與申報，并且許多國家和國際組織已經在開展病毒安全性方面的研究，在我國，已經制定、發(fā)布和實施了一些法規(guī)、條例、指南和規(guī)定。

國內外在新藥申報上存在差異，尤其是在病毒去除/滅活工藝的指示病毒方面存在不同。國內的指導原則要求，病毒清除驗證選擇的指示病毒，至少包括單鏈和雙鏈的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、強和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒。國外則要求盡可能選擇污染產品最相似的病毒進行驗證，即特異性指示病毒；同時需要關注理化性質較寬的非特異性病毒。

那么，有哪些指示病毒可以用于病毒去除/滅活工藝呢？

如上表所示，在病毒去除/滅活工藝中會用到多種指示病毒。按照病毒的核酸類型分類，可以分為DNA指示病毒和RNA指示病毒兩大類。

1. DNA指示病毒

已經用于病毒滅活/去除研究的DNA指示病毒，諸如偽狂犬病毒（PRV）、猿猴空泡病毒40（SV40）、（犬、豬）細小病毒等。

偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）屬于皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科。PRV是有包膜的雙鏈DNA病毒，能夠感染大多數(shù)的哺乳動物，在自然條件下，豬、牛、犬、鼠等都可以感染發(fā)病。PRV致病性強，感染性也強，并且死亡率高。豬（包括家豬和野豬）通常是這一病毒的貯存宿主，人類并非潛在的宿主。因此，PRV常用作生物組織提取制品及動物源性醫(yī)療器械產品病毒滅活驗證中的指示病毒。

猿猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus 40，SV40）屬于乳多空病毒科，無囊膜，是最簡單的雙鏈DNA病毒之一，是一種小型的20面體的蛋白質顆粒。SV40的天然宿主是恒河猴。目前，SV40分離株主要是從被污染的**、猴子和人體內分離。V40是一種DNA腫瘤病毒，具有一定的整合性。SV40對紫外線和高溫具有很強的抵抗力，β-丙內脂對該病毒有很強的滅活作用。

單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）屬皰疹病毒科的α病毒亞科，病毒顆粒直徑大小約180nm，有囊膜，是嗜神經性雙鏈DNA病毒。HSV唯一的自然宿主是人，主要通過直接密切接觸和性接觸傳播。HSV抵抗力較弱，易被脂溶劑滅活。

細小病毒無包膜，屬于單鏈DNA病毒，對外界抵抗力較強，對酒精、乙醚、氯仿有抵抗性，對溫度也有一定耐受性。此類病毒的自然宿主較多，比如豬、犬、貓、牛、鼠等，在實驗感染條件下，其宿主范圍還可進一步增加。

犬細小病毒（Canine Parvovirus，CPV）主要的自然宿主是犬，尤其幼犬，傳染性極強，死亡率也高。CPV的傳染途徑一般認為是消化道，易感動物主要由直接或間接接觸而感染。CPV對多種理化因素和常用消毒劑具有較強的抵抗力。CPV具有細小病毒的典型特性，也是常用的指示病毒。

豬細小病毒（Porcine parvoviurs，PPV）的唯一宿主是豬，且任何階段的家豬和野豬都能夠感染PPV，感染后終生帶毒。PPV對熱具有強大抵抗力，56℃24小時病毒的感染性和血凝性均無明顯改變。但0.5%漂白粉、1%～1.5%氫氧化鈉5分鐘能殺滅病毒。PPV常用作抗性和最小病毒的指示病毒。

2. RNA指示病毒

已經使用的RNA指示病毒：水泡性口炎病毒（VSV）、副黏病毒、鼠白血病病毒（MuLV）、辛德比斯病毒（SinV）、牛病**腹瀉病毒（BVDV）、脊髓灰質炎薩賓1型病毒（PV1）、腦心肌炎病毒（EMCV）、呼腸孤病毒3型（Reo-3）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、甲型肝炎病毒（HAV）、副流感病毒（PIV）等。

水泡口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）粒子為子彈狀或圓柱狀，是有包膜的負鏈RNA病毒。VSV能感染多種動物和昆蟲，主要感染家畜和馬。VSV在大多數(shù)脊椎動物、鳥類、爬行動物、魚類及昆蟲的細胞培養(yǎng)上可以生長。0.05%結晶紫可使其失去感染性。VSV常用作有囊膜RNA病毒的指示病毒。

鼠白血病病毒（Murine leukosis virus，MuLV）是哺乳動物C型逆轉錄病毒的代表種。MuLV可感染大鼠和新生小鼠，可在正常小鼠脾細胞培養(yǎng)物中良好增殖。也可在大鼠、倉鼠的胚胎細胞中增殖，并使細胞發(fā)生轉化。MuLV對乙醚敏感，對熱敏感，在50℃水浴中經30min即可使病毒滅活。

呼腸孤病毒（Reoviruses，Reo）是具分節(jié)段的雙鏈RNA基因組的一類病毒，病毒粒呈球形，按照血清型屬于3型。Reo病毒分布極廣，包括能感染人、脊椎動物、昆蟲、植物的5個屬。Reo病毒具有較廣的細胞親嗜性，能在MDEF、CEF、AD293、Marc145、Vero、ST、MDCK等多種細胞中增殖并產生細胞病變。Reo對乙醚不敏感，對氯仿輕度敏感，對pH3有抵抗力，室溫下過氧化氫作用1h不能使其滅活，70%乙醇和0.5%有機碘可滅活病毒。

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